PBMC细胞分离，冻存和复苏
全面解决方案
高效工作，精准温度控制，高细胞活性
PBMC（Peripheral blood mononuclear cell外周血单个核细胞）是指从外周血中分离出来的单个核细胞，主要包括淋巴细胞、单核细胞和少量的树突状细胞。其中淋巴细胞又包括T细胞、B细胞和自然杀伤细胞（NK细胞），在免疫应答中发挥关键作用。单核细胞则可分化为巨噬细胞和树突状细胞，参与抗原呈递和免疫调节。
PBMC在医学和科研中，可用于免疫研究，疾病诊断和监测，疫苗开发，药物测试等多种重要场景。冷冻保存通常仍然是研究PBMC表达和功能的不可避免的一步，特别是针对罕见疾病，样本稀缺且难以集中获得。冷冻保存对于建立生物库和用新方法研究历史样本至关重要。当这些细胞用于诊断或治疗目的时，保持其功能能力和存活率尤为重要。
对PBMC进行研究，需要经历血液采集，PBMCs分离、PBMCs冻存以及PBMCs解冻几个流程。点成的解决方案可以帮助您进行高效的工作，并且通过卓越的程序降温仪，在冷冻过程中提供更精准的温度控制。从而更大程度的避免细胞在冻存过程中受到损伤。从而获得高的细胞活性。
以下是PMBC分离，冻存，以及解冻的全流程
准备材料：全血样本，Ficoll-Paque，缓冲液，冻存保护剂等。
准备设备：点成LMC-3000台式低速离心机，点成C系列移液器，点成LUNA-FL™双荧光细胞计数仪，点成CRFT程序降温仪，点成JBA系列恒温水浴。
PBMC 分离
1
全血混匀
收集的全血样本需要充分混匀，防止血液成分沉淀。
2
准备分离介质
在离心管底部加入适量的Ficoll-Paque，通常为全血体积的1/2到2/3。
3
加入全血
将全血小心地在Ficoll-Paque上方分层加入离心管，避免扰动Ficoll的层。
4
离心
将管子放入点成DC-LMC-3000台式低速离心机，进行离心。
DC-LMC-3000台式低速离心机
DC-LMC-3000台式低速离心机优势：在PBMC分离过程中，需要几次进行离心操作，LMC-3000离心机，最大离心加速度可达560g，转速100-3000rpm可调节，适用于PBMC分离过程
- 定时功能：1 ~ 90分钟,自动关机功能
- 适配不同的离心管，更换转子方便快捷，最大可容纳12支离心管或2个微孔板
- 转子的“软启动”和“慢停止”功能
- 多重加减速模式
- 采用特殊定制强力电机，运行安静
- 2行高清液晶显示屏，快速设定时间和转速
- 自动”不平衡性”检测，停止运行并发出警报
5
分层
离心结束后，离心管中出现若干层：上层为血浆。中间层是PBMC（外周血单个核细胞）。下层为红细胞和其他成分。
6
提取PBMC
小心地用移液器吸取中间层（PBMC），避免吸取上下层的血浆和红细胞。
7
洗涤细胞
将提取的PBMC转移到新离心管中，加入生理盐水洗涤细胞。轻轻混匀后，离心以去除分离介质。
8
重悬细胞
洗涤后的PBMC细胞用适合的培养基或缓冲液重悬，准备进行后续的实验，如细胞培养、免疫检测等。
PBMC 冻存
1 准备冻存液
将PBMC细胞重悬在适量的冻存液中，一般推荐的DMSO浓度为5%-10%，其余成分可以选择新鲜的培养基（如RPMI1640）或胎牛血清（FBS）。
2 细胞计数与活性检测
在冻存之前，使用AO/PI双荧光染色法对PBMC细胞进行染色，然后利用点成DC-LUNA-FL™双荧光细胞计数仪自动计数细胞，进行活性检测。
DC-LUNA-FL™双荧光细胞计数仪
多种计数模式：DC-LUNA-FL™ 具有四种计数模块：明场细胞计数、荧光细胞计数、酵母细胞计数和 GFP 转染分析
先进的成像软件和GFP、RFP荧光光学元件灵敏地检测荧光染色细胞。
快速高效荧光:30s = 3个图像捕获和分析，明场:10s = 1个图像捕获和分析
3 分装细胞
将PBMC细胞分装到冻存管中。
4 程序降温
将冻存管放入点成CRFT程序降温仪，根据细胞特性逐渐降温至-80℃后转移至液氮中进行长期保存。大部分细胞适合的降温速率为1-2℃/min。而胚胎，细胞团等需要选择更低的降温速率，PBMC细胞也是如此。使用程序降温仪，可以为不同阶段分别设置合适的降温速率，并进行更精准地控制。
PBMC 解冻
当需要使用冻存的PBMC时，解冻可以按照以下步骤进行
1 迅速解冻
从液氮中取出冻存管，迅速在37℃点成JBA系列恒温水浴中进行解冻。
2 废液去除
解冻后，将细胞转移到离心管中，加入预热的生理盐水（PBS或培养基），使用点成DC-LMC-3000台式低速离心机进行离心，以去除DMSO。
3 重悬细胞
离心后，将细胞重悬在适合的培养基中，并使用点成DC-LUNA-FL™双荧光细胞计数仪自动计数细胞，进行活性检测。
应用案例
使用点成CRFT免液氮程序降温仪大幅提升PBMC细胞的复苏存活率
某武汉高校艾滋病研究领域的重点课题组，该团队聚焦人类重大病毒性传染病和恶性肿瘤的临床治疗难题，使用PBMC细胞进行肿瘤及 HIV 感染的免疫治疗研究。
该课题组目前的冻存方法是使用的冻存盒放在冰箱中进行降温，但复活率较低，只有30%-40%。为了提高细胞的复活率，该课题组和点成联合进行了一次实际测试。
在测试中，我们使用点成DC-CRFT程序降温仪，根据冻存细胞的特性，设置了合适的慢冻曲线，整个冻存过程中，点成DC-CRFT降温曲线与设定温度一致性非常好，意味着CRFT程序降温仪有这出色的温度控制能力。根据设定程序，使用程序降温仪将样品冷冻至-80℃，后转入液氮中保持。冻存后复苏，测试样品的复苏率大幅提升，达到了93%，可以极大地帮助用户节省时间和资源，提高实验效率。
点成合作伙伴 信任来自日积月累的专业知识和丰富经验
联系我们
各分部
广州 | 上海 | 苏州 | 北京 | 西安 | 成都 | 台湾 | 香港 | 日本 | 韩国
免费电话
400-999-3848
邮箱
info@dichbio.com
扫码添加工程师微信
* 您提交的信息将得到严格保密，我们绝不泄露给第三方