概述
精准的细胞计数是推动生物技术进步的基础。从细胞传代判定到复杂生物测定，从单细胞测序分析到细胞治疗剂量确定，细胞计数贯穿生物技术全流程。精确且一致的计数结果保障下游流程质量，反之将导致后续工艺参数失准。
点成 LUNA-FX7™全自动细胞计数仪，采用尖端光学系统、优化算法及精密自动对焦技术，可满足明场与双荧光双重检测需求。本研究通过 K562 细胞验证活率检测准确性，并采用校准微球评估设备内和设备之间差异。
- 高精准度：改进的计数算法与增加的测量体积降低使CV值低到甚至小于1%。
- 单次检测多个样品：新的8-和3-道计数板增加检测通量。
- 细胞浓度范围扩大：5 x 10⁴ – 1 x 10⁷ cells/mL， 适用于多种细胞计数应用，包括单细胞测序和CAR-T剂量测定。
- 明场和荧光计数都很出色：通过优化的软件算法实现快速精确的自动对焦，达到理想的计数效果。
- 设备可靠性：内置QC软件和适用于明场、荧光计数的“验证计数板”,确保每日QC监控报告。
- 符合21 CFR PART 11法规：CountWire™软件提供数据安全和可访问性管理。
一、实验材料及方法
01 细胞样本制备
- K562细胞培养与处理：首先，将健康的 K562 细胞制备成 2 x 10⁶ 个细胞/mL 的浓度。将一半细胞在95°C下加热处理30分钟，以获得死亡细胞。通过混合活细胞和死亡细胞，制备了五种不同活力的细胞样本。
- 染料计数方法：这些制备好的细胞样本随后在明场模式下使用台盼蓝染料（Cat# T13101）进行计数。同时，在双荧光模式下使用吖啶橙/碘化丙啶（AO/PI）染料（Cat# F23001）进行计数。
02 仪器变异性评估
- 校准微珠样本制备：为了评估设备内和设备间的变异性，采用具有预定浓度的红色和绿色荧光微珠对样本进行了计数。具体而言，样本由点成 LUNA-FX™ 校准微珠套件（Cat# F73101）中的 1:1 绿色荧光和红色荧光校准微珠混合物制备。这些微珠样本的活力率预设为 50%，并加载至 PhotonSlide™（Cat# L12005）进行计数。
- 设备间偏差评估：设备间偏差的评估采用了七台不同的点成 LUNA-FX7™ 仪器。
二、实验结果
K562 细胞计数的重复性与准确性
通常，由于死亡细胞存在一些难以处理的活力情况，计数器的准确性和可靠性可能会降低，从而导致评估结果不准确。
我们制备的 K562 细胞样本总浓度为 2 x 10⁶ 个细胞/mL，包含五种不同活/死细胞组合（图 1 和图 2）。在明场和荧光计数模式下，点成 LUNA-FX7™ 精确地测定了所有样本的活力和浓度
图 1. 点成 LUNA-FX7™ 在明场计数模式下的线性表现
细胞在明场计数及活率模式下使用台盼蓝染色进行计数。(A-E) 分别为 0%、25%、50%、75% 和100% 活率的标记图像。(F) 测得的 K562 细胞活率与预期活率的对比绘图。(G) 在五种不同活率样本中，总细胞浓度的一致性表现。
图 2. 点成 LUNA-FX7™ 在双荧光计数模式下的线性表现
细胞在荧光计数模式下使用 AO/PI 染料进行计数。(A-E) 分别为 0%、25%、50%、75% 和 100% 活率的标记图像。(F) 测得的 K562 细胞活率与预期活率的对比绘图。(G) 在五种不同活率样本中，测得的总细胞浓度保持稳定。
三、设备内/设备间偏差
养细胞的计数重复性对于下游应用至关重要。为了验证点成 LUNA-FX7™ 的结果一致性和重复性，进行了两项独立的评估。
首先，通过重复计数 LUNA-FX™校准微珠试剂盒（Cat# F73101）来确定设备内偏差：使用 1:1 的绿色荧光（GF）和红色荧光（RF）校准微珠混合物，每次取 10 µl，在 4 台独立设备上各重复计数 5 次（表 1）。
其次，通过在 7 台不同的点成 LUNA-FX7™ 设备上计数 4 张独立的微珠载玻片，测量设备间偏差（表 2）。点成 LUNA-FX7™ 的设备内评估和设备间评估均表明其具有卓越的计数重复性。具体而言，4 台设备的设备内变异性对于细胞浓度、活率和细胞大小的测定均不超过 1%（图3），而 7 台不同设备的设备间变异性在所有参数上的偏差均低于 2.02%。
表 1. 点成 LUNA-FX7™ 的设备内变异性
表 2. 点成 LUNA-FX7™ 的设备间变异性
图 3.点成 LUNA-FX7™ 的设备内和设备间重复性。设备内和设备间测定的变异系数（CV%）均不超过 3%
四、实验结论
点成 LUNA-FX7™ 自动细胞计数仪在细胞浓度、活力和平均大小的测量中表现出卓越的准确性和一致性，无论是设备本身还是不同操作人员之间。其设备内和设备间的差异性极小，为研究实验室和机构从单台到多台点成 LUNA-FX7™ 的数据重复性和可靠性提供了可靠支持。
结语
点成生物为您提供多种高精度全自动细胞计数仪，包括明场细胞计数仪、荧光细胞计数仪、自动细菌计数仪，以及各类全面的耗材配件。
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