印迹杂交,是基因诊断技术的一种,根据作用对象的区别可分为Northern杂交、Southern杂交和Western杂交。Northern杂交用于分析RNA;Southern杂交用于分析DNA;Western杂交用于分析蛋白质。其操作过程所需的试剂量少,灵敏度高,所以应用较为普遍。
一、印迹杂交的基本概念
- 核酸变性:在某些理化因素(温度、酸碱、有机溶剂、尿素等)作用下,核酸分子互补双链之间氢键断裂,使双螺旋结构松散变成单链的过程。
- DNA变性:在变性因素作用下,DNA分子互补双链之间氢键断裂,使双螺旋结构解开成两条单链的过程。
- DNA复性(renaturation):在适当条件下,变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象。
- 退火(annealing):热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性。
DNA变性的本质是双链间氢键的断裂
原理:
生命大分子物质(如核酸或蛋白质)印迹到固相载体上,经淬灭试剂处理后,可与相应的探针(酶标记)反应,接着用适当的溶液漂洗,底物溶液显色,即可现出谱带。如所用探针为放射性核素标记物时,则应将漂洗后的载体进行放射自显影,即可检测出样品中特异的成分。
简而言之,主要就是通过核酸分子在变性后再复性的过程中,可引入其他来源的核酸进行互补配对的特性,通过探针进行标记,可对DNA/RNA/蛋白质进行定性和定量分析。
目前印迹技术是目前生物医学研究中最为常用的基本分子生物学技术,在生物医学基础研究以及临床诊断应用等方面广泛应用,譬如用于基因克隆的筛选、基因的定量和定性分析及基因突变的检测等。
二、点成PS-M3D多功能三维摇床助力印迹杂交技术
印迹杂交技术中,样品混匀是不可缺少的一个实验环节,无论是样本制备过程中待测样本的纯化和提取,还是之后的凝胶洗脱,都需要运行稳定的样品混匀装置。
点成提供PS-M3D多功能三维摇床,不仅提供温和的三维圆周旋转混合模式、还提供往复式混合模式和振荡混合模式,充分优化培养皿、培养槽等容器中样品的混合,利用少量溶剂就可达到样品充分混合的要求。