结核杆菌培养基的制备全过程

结核杆菌培养基的制备全过程

结核分枝杆菌俗称结核杆菌、结核菌,它是引起结核病的病原体。1882年由德国细菌学家郭霍(Robert Koch,1843-1910)发现并证明为人类结核病的病原菌,该菌可侵犯全身各器官,其中引起的肺部疾病——肺结核最为多见,是严重影响人类生命健康的传染病之一,成为了全球尤其是发展中国家最为严重的全球性卫生问题。对于结核杆菌的研究,仍是全世界研究人员重点研究内容之一,研究人员往往需要较多的样本量基础,相关培养基的批量制备和储存就尤为重要了。

结核杆菌常用的培养基是罗氏培养基,全称为罗-琴(Lowenstein-Jensen)培养基。

罗氏培养基的主要组成成分及参考量如下:

磷酸二氢钾2.4g;一水硫酸镁0.24g;拘掾酸镁0.6g;天门冬素3.6g;马铃薯淀粉30g;2%孔雀绿水溶液20ml;蒸馏水600ml;甘油12ml;新鲜鸡蛋液1000ml

罗氏培养基的制备方法及步骤:

  • 在无菌区间内,将上述材料中的磷酸二氢钾、硫酸镁、拘掾酸镁、天门冬素和甘油溶解与蒸馏水中并加热
  • 在加热的同时加入马铃薯淀粉并不断搅拌,在沸水中水热1小时,再置于56度水浴锅中水浴1小时;
  • 用肥皂水清洗鸡蛋,之后用70%的酒精擦洗,晾干;
  • 无菌条件下打破蛋壳,将蛋白蛋黄装入灭菌容器中,充分搅拌混匀,之后用无菌纱布进行过滤,得到新鲜鸡蛋液;
  • 将鸡蛋液加入到一开始准备的混合液中,并加入灭菌的2%孔雀绿水溶液,均匀混合,避免气泡;
  • 将混合好的溶液分装到灭菌的试管内并封闭,每支试管液量在6-8ml左右;
  • 将试管放在架子上并保持一定斜度,然后放在蒸汽浓缩器(例如点成TBT-T100IN结核菌培养基制备仪)中,在85℃的水浴中静置50分钟来浓缩培养基;
  • 之后取出并放置于4℃冰箱中低温保存备用;
  • 使用时取出并恢复到室温,检查培养基是否污染即可,一般建议一个月内使用。

在制备罗氏培养基的过程中,需要用到一些必要的仪器,如用于恒温控制水浴锅、用于消杀病毒细菌灭菌器、还有专门用于批量浓缩凝固培养基蒸汽浓缩器等,点成均可提供以上设备,还可以提供无菌环境的超净工作台,满足实验需求。

点成SAP系列恒温水浴

点成NC150/150C卧式蒸汽灭菌柜

点成TBT-T100IN结核菌培养基制备仪

点成UVT-S-AR超净工作台

发表回复