使用自动细胞计数仪进行酵母细胞计数

使用自动细胞计数仪进行酵母细胞计数

概述

酵母可用于基础研究、酿造和蒸馏以及食品生产等多种应用,这些应用的全过程都离不开准确的细胞计数和活力测定。事实证明,较小的尺寸和形态对于自动细胞计数仪来说是相当具有挑战性的,利用活体染色剂手动计数酵母的方法繁琐且容易出错。在这篇文章中,我们分享了如何利用LUNA FX7自动细胞计数仪准确可靠地对酵母细胞进行计数。

实验方法

1.将酵母菌株EC1118接种到YPD肉汤中,30℃、200 rpm培养过夜

2.将酵母按照1:3至1:5的比例稀释在1XPBS中

3.稀释的培养物被稀释成2个相等的样品,然后将一份样品热灭活(65℃,20分钟)以生成“活细胞和死细胞”,用于活力测试

4.使用酵母细胞缓冲液Ⅱ按细胞:缓冲液=1:5和1:10的比例进一步稀释细胞

5.活力测试:如表混合活细胞和死细胞

0%

25%

50%

75%

100%

活细胞

0μl

25μl

50μl

75μl

100μl

死细胞

100μl

75μl

50μl

25μl

0μl

实验结果

1. LUNA-FX7自动细胞计数仪计测的细胞活力线性情况

为了确定细胞活力的线性情况,使用活细胞和死细胞制备各种活力的样品,然后使用LUNA-FX7自动细胞计数仪进行计数。使用LUNA-FX7,可以在荧光模式下检查活力,也可以用明场模式的[CELL COUNTING & VIABILITY]检查。

为了在明场模式下测定细胞活力,将酵母样品与相同体积的0.02%亚甲蓝染色剂混合,并将10 μl样品加载到LUNA细胞计数载玻片上。酵母样品制备为死细胞(0%)、25%、50%、75%、活细胞(100%)。

使用LUNA-FX7 自动细胞计数仪

明场模式的[CELL COUNTING & VIABILITY]测定细胞活力

用亚甲蓝染色并标记的酵母细胞

如图所示,将5个样品用0.02%的亚甲蓝染色并在明场模式的[CELL COUNTING & VIABILITY]中进行图像观察与拍摄。重复计数3次,计算平均活力,并据此确认细胞活力的线性情况。在LUNA FX7明场模式[CELL COUNTING & VIABILITY]测得的活力R2=0.9964,与理论活力高度吻合。

使用LUNA-FX7 自动细胞计数仪

明场模式的[CELL COUNTING & VIABILITY]测定细胞活力

线性图证实了测量的活力与理论预期的活力(R2=0.9964)

紧接着,为了研究荧光模式下的细胞活力,将5个酵母样品用AO/PI 染色剂染色,并将10 μl样品加载到Photoslide载玻片中。在AO/PI染色后,拍摄并观察图像。

如下图所示,对5个不同活力的样品进行3次计数,测得的酵母细胞活力为R2=0.9979,与理论活力具有显著相关性。

使用LUNA-FX7 自动细胞计数仪

荧光模式下的[CELL LINES & PRIMARY CELLS,ADVANCED]测定细胞活力

用吖啶橙/碘化丙啶染色并标记的酵母细胞

使用LUNA-FX7 自动细胞计数仪

荧光模式下的[CELL LINES & PRIMARY CELLS,ADVANCED]测定细胞活力

线性图确认了测量的活力和理论上预期的活力(R2=0.9979)

2. LUNA-FX7自动细胞计数仪细胞浓度分析的线性情况

为了确定使用LUNA-FX7 自动细胞计数仪计数酵母时不同浓度的线性,制备了高浓度酵母,并通过连续稀释来测量浓度。

为了在明场模式下观察,用0.02%亚甲蓝染色,并分别在明场模式下的[TOTAL CELL COUNTING]和[CELL COUNTING & VIABILITY]中进行计数。

从图中可以看出,测得的R2值分别为0.998和0.9991。在荧光模式下也同样观察到这一点,当用AO/PI染色并在[ADVANCED]模式下捕获时,R2值为0.9753。这意味着使用LUNA-FX7进行的酵母计数显示出从高浓度到低浓度的高线性度,且使用LUNA-FX7可以进行更准确的测定。

在LUNA-FX7 自动细胞计数仪的明场模式下测量酵母样品的浓度

总细胞计数

细胞计数和活力

在LUNA-FX7自动细胞计数仪荧光模式的[CELL LINES & PRIMARY CELLS, ADVANCED]中测量酵母样品的浓度

2. LUNA-FX7自动细胞计数仪细胞浓度分析的线性情况

我们进行了一项实验来比较传统使用的血细胞计数器(Hemocytometer)和LUNA-FX7

与之前的实验一样,样品用0.02%亚甲蓝和AO/PI染色,并各10 µl装载到血细胞计数器、LUNA细胞计数载玻片和 PhotonSlide载玻片上。在LUNA-FX7的明场和荧光模式两种模式下拍摄图像,并将浓度与血细胞计数器上测量的浓度进行比较。如图所示,血细胞计数器测量的值与LUNA-FX7测量的值没有观察到显著差异。

血细胞计数器和LUNA-FX自动细胞计数仪的酵母计数结果比较

结论

在此实验中,我们证明了LUNA-FX7可以准确可靠地对酵母细胞进行计数。此外,与传统的手动计数方法相比,使用LUNA-FX7计数酵母的速度快20倍、更可靠且不易出错。

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