细胞计数专题 | 荧光染料诱导的微生物培养基背景信号分析

细胞计数专题 | 荧光染料诱导的微生物培养基背景信号分析

随着点成微生物细胞计数仪 QUANTOM Tx™的推出,基于单细胞水平的细菌计数方法正在逐步取代传统、耗时的 CFU/ml 测定。该仪器利用细胞膜通透性,借助荧光染料对细菌核酸进行染色,可在几分钟内快速完成准确计数。

在微生物培养过程中,需根据菌种特性、生长条件及研究目标选择合适的培养基。尽管常规培养基本身不具备自发荧光特性,但其成分可能与荧光染料发生相互作用,进而导致背景荧光增强,影响信号判读。因此,建议实验前将培养基(如添加了点成 QUANTOM™ 总细胞染色液)与荧光染料混合,评估背景噪声水平差异,以优化实验条件。

结果与讨论

本研究所测试培养基包括:营养肉汤(NB)、鲁里亚-贝尔塔尼(LB)肉汤、无羊血的胰蛋白酶大豆肉汤(TSB)、含羊血的胰蛋白酶大豆肉汤(TSB-SB)、酵母提取物蛋白胨葡萄糖(YPD)培养基、de Man-Rogosa-Sharpe(MRS)培养基。

 

图1 显示培养基与QD试剂按1:10混合后的背景信号变化(A:GFP信号对比蒙太奇图;B:柱状图量化分析)

未添加点成QUANTOM™总细胞染色液时,各培养基均未检测到自发荧光背景信号。添加染色液后所有培养基均出现背景信号增强现象,其中MRS培养基背景噪声最为显著。建议实验操作时避免将荧光染料直接与培养基混合,而应使用PBS缓冲液稀释培养细胞,以消除背景荧光干扰。

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