1 引言
在生物医学研究中，准确的细胞计数至关重要，它影响着细胞治疗、疾病诊断、组织再生和生物测定等应用领域。传统的手动计数方法既耗时又容易产生偏差。像点成LUNA-III™自动细胞计数仪这样的自动化系统，为提高计数的准确性、可重复性和效率提供了解决方案。
点成LUNA-III™自动细胞计数仪在其前身点成LUNA-II™成功的基础上进行了多项关键改进，从而增强了其功能和性能。这些改进包括对大型或聚集细胞的活细胞检测，新增的内部存储功能和更好的自动对焦功能，重新分析数据功能以及 “查找细胞” 功能，并且在细胞浓度和活力测量方面具有出色的线性和稳定性。
#点成LUNA-III™自动细胞计数仪介绍 #
点成LUNA-II™以其高可靠性和精准度广受认可，但它存在一个局限性——无法对死细胞团进行解聚处理，而点成LUNA-III™成功克服了这一挑战（图1）。由于用台盼蓝（TB）染色的死亡细胞在细胞边界处的亮度差异极小，传统算法很难对这些死亡细胞进行解聚处理。
点成LUNA-III™通过一种机器学习算法解决了这个问题，该算法能够准确区分聚集细胞的形状。同时点成LUNA-III™ 还能准确识别形状不规则或亮度较暗的细胞，从而改进了活细胞检测功能，确保获得更可靠的结果。
图 1：绿色圆圈表示活细胞，红色圆圈表示死细胞。点成LUNA-III™在细胞聚集和形态多样性情况下仍能精准识别死细胞，展现了其先进的算法性能。
除了这一关键改进之外，点成LUNA-III™还拥有多项新功能，旨在提升用户体验和工作流程效率：
内部存储：可直接在设备上保存和管理数据，简化工作流程，确保轻松访问结果。
重新分析：可重新分析先前捕获的图像，以确保数据分析的准确性和一致性。
查找细胞：利用”查找细胞“功能自动调整焦平面和曝光水平，确保分析全面且精确。
这些改进使点成LUNA-III™成为了高精度、高效率细胞计数与存活率评估的理想工具，进一步巩固其在细胞分析领域作为可靠且创新解决方案的地位。
2 材料与方法
#点成LUNA-III™自动细胞计数仪 #
所有测量均使用点成LUNA-III™的默认方案设置，并使用了三台点成LUNA-II™设备，在标准质量控制程序后测试其内部偏差。
#细胞系和试剂 #
实验采用U937（悬浮细胞）和3T3（贴壁细胞）两种细胞系。U937细胞培养于RPMI-1640培养基（含10% FBS和1%青霉素/链霉素），3T3细胞培养于DMEM培养基（含10% FBS和1%青霉素/链霉素）。使用0.4%台盼蓝（货号T13001）进行活力评估。
#细胞浓度和活力的线性 #
细胞以最高1×10⁷个细胞/mL浓度（3T3细胞最高为6×10⁶个细胞/mL）开始进行梯度稀释，并使用点成LUNA FX7™全自动细胞计数仪测量浓度。活细胞取自指数生长期的培养物，死细胞通过在100℃加热30分钟获得。不同比例的活细胞和死细胞混合形成不同活力的样本，以评估存活率线性度。
3 实验结果
#细胞浓度的线性 #
为评估点成LUNA-III™的细胞计数线性度，从以下三方面进行了测试：（1）不同技术人员之间的差异（图2A）、（2）不同细胞系之间的差异（图2B）、（3）点成LUNA-III™与血球计数板测量结果的对比（图2C）。
首先，由两名经验不同的技术人员分别测量梯度稀释的U937细胞浓度，结果显示点成LUNA-III™在不同用户操作下仍保持高线性度（R²≥0.9997）。然后由一名技术人员测量U937和3T3细胞的梯度稀释样本，点成LUNA-III™依然展现出卓越的线性度。最后，将点成LUNA-III™的计数结果与血球计数板进行对比，点成LUNA-III™同样表现出极高的线性度（R²≥0.9996）（图2D）。这些结果证明点成LUNA-III™无论在不同操作人员还是不同细胞类型情况下，均能提供稳定可靠的细胞浓度测量。
图2.（A）不同经验技术人员测量U937细胞的线性度，点成LUNA-III™表现出R²≥0.9997的高一致性。（B）U937和3T3细胞的线性测量对比，R²≥0.9998。（C）点成LUNA-III™与血球计数板测量对比，R²≥0.9996。（D）点成LUNA-III™计数的U937（上）和3T3（下）细胞图像，展现其精准稳定的细胞检测能力。
#细胞系与试剂 #
为了评估点成LUNA-III™在不同细胞系的活力线性度，我们混合不同比例的活细胞和死细胞，得到存活率从0%到100%的样本，并由一名技术人员测量。结果表明点成LUNA-III™在U937和3T3细胞的存活率测量中均表现出极高的线性度（R²≥0.9998）（图3A）。此外，其细胞图像清晰地展现了准确识别的活细胞（绿色圆圈）和死细胞（红色圆圈），进一步验证了点成LUNA-III™的准确性（图3B）。这些数据表明点成LUNA-III™在不同细胞类型间均能提供高度可靠的存活率测量。
图3.（A）U937（蓝色）和3T3（红色）细胞的存活率测量结果，点成LUNA-III™表现出极高的线性度。（B）点成LUNA-III™计数的U937（上）和3T3（下）细胞图像，清晰识别活细胞（绿色）和死细胞（红色）。
结论
点成LUNA-III™全自动细胞计数仪在细胞计数和存活率评估方面取得了显著进步，弥补了点成LUNA-II™在死细胞聚团检测和不规则形态细胞存活率检测上的不足。其新型机器学习算法、内部存储、数据重分析及“查找细胞”功能，使其成为研究人员高效、精准、可靠的细胞分析工具。实验结果证实点成LUNA-III™在细胞浓度和存活率测量方面具备卓越的线性度和稳定性，适用于常规细胞计数及更复杂的存活率评估需求，为研究人员提供了高效、精准、易用的解决方案。
想要了解更多信息，请联系我们
