细胞培养是指在体外模拟生物体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术，是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，通过细胞培养既可以获得大量细胞，又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。
细胞培养的具体步骤可分为：细胞复苏、细胞传代、细胞冻存
一、细胞复苏
- 细胞复苏的原则：快速融化
在复苏细胞时必须遵循快速融化的原则，即必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至 37 ℃，因为这样可使冻存时细胞外的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。
- 细胞复苏操作过程
二、细胞传代
- 细胞传代中遇到的问题及解决方案：
- 传代密度过高：一旦细胞养太久至融合度过高（>90%）才传代，容易使细胞产生老化现象，甚至是堆叠，再消化细胞时不易吹打成单颗细胞，即便再重新铺盘传代，细胞也无法回到原本的特性了。（如：单层细胞，没长满就发生堆叠现象）
解决方案：尽量避免融合度过高，镜下观察融合度约达到80%即可传代分盘。
- 传代密度低：哺乳动物贴壁培养细胞，若细胞培养到80-90%密度需要开始传代，在传代接种细胞密度过低，细胞间距离太远，就无法在细胞间产生黏附及通信作用，帮助信号传导并活化细胞；总体细胞量不足，分泌的生长因子浓度会不足以产生利于生长的微环境，以上皆会造成增殖速度迟缓或细胞死亡。
解决方案：细胞传代时，要进行准确的细胞计数，确保铺盘的密度。
- 细胞传代操作过程：
三、细胞冻存
- 细胞冻存的基本原理：慢冻
- 手动降温：将细胞依序放在4℃（30分钟）、-20℃（1小时）、-80℃（过夜）后移至液氮中保存。
- 程序降温盒：是一般最广泛使用的降温法，为一种特制冷冻容器（填充异丙醇或依靠特制金属导热），使细胞以每分钟约-1℃的速度降至-80℃（过夜），然后移至液氮中保存。
- 免液氮程序降温仪：一种新型自动化程序降温方法，通过微处理器精确控制冷却速率和样品温度，能够控制样品线性/非线性降温，能够有效减少冻融过程对于细胞或组织的伤害，重现性好，降温过程可控，成本低。（例如点成生物CRF-1免液氮程序降温仪）
- 细胞冻存操作过程：
点成生物产品推荐：CRF-1程序降温仪
