细胞培养三步骤——复苏、传代、冻存 Post author:dianchengbio Post published:2023年4月27日 Post category:行业知识普及 Post comments:0评论 细胞培养是指在体外模拟生物体内环境(无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等),使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克隆技术,是细胞生物学研究方法中重要和常用技术,通过细胞培养既可以获得大量细胞,又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。细胞培养的具体步骤可分为:细胞复苏、细胞传代、细胞冻存 一、细胞复苏 细胞复苏的原则:快速融化在复苏细胞时必须遵循快速融化的原则,即必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至 37 ℃,因为这样可使冻存时细胞外的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。细胞复苏操作过程 二、细胞传代 细胞传代中遇到的问题及解决方案:传代密度过高:一旦细胞养太久至融合度过高(>90%)才传代,容易使细胞产生老化现象,甚至是堆叠,再消化细胞时不易吹打成单颗细胞,即便再重新铺盘传代,细胞也无法回到原本的特性了。(如:单层细胞,没长满就发生堆叠现象)解决方案:尽量避免融合度过高,镜下观察融合度约达到80%即可传代分盘。传代密度低:哺乳动物贴壁培养细胞,若细胞培养到80-90%密度需要开始传代,在传代接种细胞密度过低,细胞间距离太远,就无法在细胞间产生黏附及通信作用,帮助信号传导并活化细胞;总体细胞量不足,分泌的生长因子浓度会不足以产生利于生长的微环境,以上皆会造成增殖速度迟缓或细胞死亡。解决方案:细胞传代时,要进行准确的细胞计数,确保铺盘的密度。细胞传代操作过程: 三、细胞冻存 细胞冻存的基本原理:慢冻手动降温:将细胞依序放在4℃(30分钟)、-20℃(1小时)、-80℃(过夜)后移至液氮中保存。程序降温盒:是一般最广泛使用的降温法,为一种特制冷冻容器(填充异丙醇或依靠特制金属导热),使细胞以每分钟约-1℃的速度降至-80℃(过夜),然后移至液氮中保存。免液氮程序降温仪:一种新型自动化程序降温方法,通过微处理器精确控制冷却速率和样品温度,能够控制样品线性/非线性降温,能够有效减少冻融过程对于细胞或组织的伤害,重现性好,降温过程可控,成本低。(例如点成生物CRF-1免液氮程序降温仪)细胞冻存操作过程: 点成生物产品推荐:CRF-1程序降温仪 你可能也喜欢 移液器原理及简单分类 2022年9月20日 换个视角认识“核酸”——核酸提取方法及原理 2023年3月31日 水浴还是干浴?实现恒温控制,满足恒温需求 2022年10月25日 发表回复 取消回复CommentEnter your name or username to comment Enter your email address to comment Enter your website URL (optional) 在此浏览器中保存我的显示名称、邮箱地址和网站地址,以便下次评论时使用。