ELISA实验基本原理：
ELISA实验是将已知的抗原或抗体结合在固相载体表面，然后利用酶标记（偶联）的抗体或抗原与之孵育，再通过显色物显色，其显色深浅与待测物质的含量直接相关，由此可进行定性或定量分析。
ELISA实验的常见类型：直接法、间接法、夹心法和竞争法
一、直接法（Direct ELISA）：
原理：将抗原或抗体固定于酶标板上，然后用酶标抗体或抗原直接检测。
主要用途：分析抗原的免疫反应。
优点 | 缺点 |
l 步骤少，实验周期短，检测速度快 l 不需二抗，交叉反应较低，实验不易出错 | l 实验背景高，且检测对象有限 l 灵活性差，需要针对每种靶蛋白的特异性一抗 l 检测灵敏度不高，没有使用二抗，信号没有放大 |
二、间接法（Indirect ELISA）：
原理：将抗原或抗体固定于酶标板上，随后分两步进行检测，先加入检测抗体或抗原进行特异性结合，后加入酶标二抗检测并利用底物显色。
主要用途：测定样品中总抗体的浓度。
优点 | 缺点 |
l 使用酶标二抗，灵敏度高 l 标记抗体更少，更加经济，也更灵活 | l 可能存在交叉反应，增加实验背景 l 增加了二抗孵育步骤，实验周期延长 |
三、夹心法（Sandwich ELISA）：
双抗体夹心法：将此方法常用于检测抗原。将抗体固定在固相载体上，加入待测抗原，与抗体特异性结合，再加入酶标抗体检测，并利用底物显色，即可测定总靶标蛋白的含量。
双抗原夹心法：反应模式与双抗体夹心法类似，用固相抗原和酶标特异性抗原，分别代替固相抗体和酶标特异性抗体，即可测定样品中的抗体。
主要用途：对复杂样品进行分析，适用于检测具有两个以上识别位点的大分子蛋白。
优点 | 缺点 |
l 灵敏度和特异性高 l 抗原无需事先纯化 | l 对配对抗体要求高 |
四、竞争法（Competitive ELISA）：
原理：样本中的抗原及预包被的酶标抗原，竞争性地与固相抗体相结合。样本中的抗原含量越多，结合在固相上的酶标抗原就越少，最终显色也越浅。显色结果与待检抗原（或抗体）的量成反比。
主要用途：常用于只有一种抗体可用于目标抗原的情况，也适用于检测不能被两种不同抗体结合的小抗原。
优点 | 缺点 |
l 可检测不纯的样品，数据再现性高 l 可基于其他ELISA方法，灵活性高 | l 整体敏感性和专一性较差 l 操作繁琐复杂 |