1 引言
蛋白质生产系统（如哺乳动物细胞和昆虫细胞）在生命科学、生物技术和生物医学产业中广泛应用。值得注意的是，SF9 细胞系等昆虫细胞因其以下优势被广泛用于蛋白质表达：
✦ 培养简便
✦ 放大工艺成本效益高
✦ 渗透压耐受性强于哺乳动物细胞
然而，确保高质量的蛋白质生产需要监测细胞浓度和活性，以维持健康的细胞培养和稳定的蛋白质产出。当与合适的染色方法配合使用时，点成LUNA-FX7™自动细胞计数仪可以为实现这一目标提供一种便捷的技术。本研究旨在通过比较不同的活力染色剂，推荐用于评估 SF9 细胞活力的最佳染料。
2 染色方案
分别用 0.4% 的台盼蓝染色液（T13001）、吖啶橙（AO）/ 碘化丙啶（PI）染色液（F23001）以及荧光素二乙酸酯（FDA）/ 碘化丙啶（PI）染色液（F23214）对 SF9 细胞进行染色。
台盼蓝染色
1. 混合：
10 微升 0.4% 的台盼蓝（TB）
10 微升细胞样本
2. 将10 微升染色后样本加入载玻片
3. 使用点成LUNA-FX7™进行分析
* 默认方案
荧光染色
1. 混合：
2 微升预混染料，或者每种染料各 1 微升
18 微升细胞样本
2. 将 10 微升染色后样本加入载玻片
3. 使用点成LUNA-FX7™进行分析
* 注意：根据所使用的染料，SF9 细胞可能会表现出不同的荧光强度。请根据需要进行调整
3 用于活性测定的染料
我们选择了四种常用的用于活性评估的染料：
4 评估SF9细胞的最佳染料
总结：台盼蓝和FDA/PI都适用于SF9 细胞活性评估（图 1 A），但 FDA/PI 是更优的选择。
台盼蓝常用于评估 SF9 细胞的浓度和活性。然而，我们建议贴壁培养时避免使用台盼蓝，因其在传代过程中需要物理吹打操作。SF9 细胞对机械力和搅拌敏感，贴壁培养时易产生细胞碎片，导致台盼蓝与样本中各类颗粒发生非特异性结合（悬浮培养中此问题较不明显）。
在荧光染料组合评估中，采用 AO/PI 染色的 U937 细胞作为参照验证染料性能。尽管 AO/PI 染色对多数哺乳动物细胞有效，但其效果因细胞类型而异。实验显示，AO/PI 染色的 SF9 细胞信号强度较低，推测可能与昆虫细胞基因组尺寸显著小于哺乳动物细胞有关。通过将绿光（GF）和红光（RF）曝光水平从哺乳动物细胞常规的 5 级调整至 7 级，虽 PI 信号充足，但 AO 信号强度仍弱。尽管所有细胞均被成功标记，AO 的弱信号仍可能影响整体检测性能（图 1B）。
综合上述问题，在测试的染料组合中，FDA/PI 是 SF9 细胞计数和活性评估的最佳选择。FDA 依赖细胞酯酶活性（该特性对酵母、昆虫细胞等不同类型细胞均有效，不受基因组大小影响），可在细胞质中产生高强度信号，仅需将 GF 曝光水平降至 1 级。通过优化 LED 参数（GF 1 / RF 7），FDA/PI 染料组合成为 SF9 细胞评估的首选方案。
图 1. （A）使用TB、AO/PI和FDA/PI对 SF9 细胞的染色结果。TB和 FDA/PI 能有效地对 SF9 细胞进行染色，而 AO/PI 显示出较低的绿色信号。
（B）用 AO/PI 和 FDA/PI 染色的 SF9 细胞与用 AO/PI 染色的 U937 细胞的染色结果比较。对每个样本采用了不同的曝光 水平。
标注：所有通道（荧光通道和明场通道）的合成图像，已识别的物体用红色和绿色圆圈标记。红色圆圈表示死细胞，绿色圆圈表示活细胞。
5 结论
鉴于FDA/PI组合的稳定性能和广泛适用性，其为 SF9 细胞活性评估的最佳选择。使用该组合时需将点成LUNA-FX7™的 LED 曝光参数调整为 GF 1（绿光 1 级）/ RF 7（红光 7 级）—— 这是由于FDA 在昆虫细胞中可产生高强度信号，而 PI 信号相比哺乳动物细胞可能较弱。
对于贴壁培养的 SF9 细胞，不建议使用台盼蓝染色（悬浮培养时该问题可部分缓解）。此外，虽可通过提高 LED 曝光水平改善 AO/PI 染色后 AO的弱信号问题，但可能影响点成LUNA-FX7™自动细胞计数仪的整体检测性能。
综上，选择合适的染料（如 FDA/PI）并优化点成LUNA-FX7™的曝光参数，可为 SF9 细胞质量监测提供理想解决方案。
想要了解更多信息，请联系我们
