GFP 转染效率怎么测？不用流式细胞仪，LUNA-FL™荧光细胞计数仪 30 秒出结果
LUNA-FL™ 荧光细胞计数仪可在约 30 秒内完成 GFP 转染效率测定，直接输出总细胞浓度、GFP 阳性细胞浓度、GFP 阳性细胞百分比与平均细胞大小。 其判读策略与流式细胞术一致：先分析 10 µL 阴性对照样本（未转染对照或模拟转染对照）确定细胞系本底荧光值，荧光强度超过本底水平的细胞即判定为"已转染"。通过整合荧光显微镜的硬件配置与流式细胞术的算法，LUNA-FL™ 兼具二者优势：价格合理、无需专业培训与专人操作、零维护成本，并可处理复杂样本。本文给出完整操作步骤、光学配置说明与结果验证方法。
01
引言
转染是指将外源遗传物质导入真核细胞的过程。目前已有多种转染方法，但无论采用何种方法，转染效率均无法达到100%。虽然稳定转染可在一定程度上缓解这一问题，但在瞬时转染中，转染效率的波动仍不可避免。为对比不同实验获得的结果，研究人员每次进行瞬时转染时都需测定转染效率。
测定转染效率的常用便捷方法是使用绿色荧光蛋白（GFP）基因。例如，通过将GFP与目标蛋白构建成融合蛋白，即可通过GFP蛋白的存在来监测目标蛋白的表达情况。
02
LUNA-FL™ 是怎么测 GFP 转染效率的？
Luna-FL™荧光细胞计数仪配备明场信号与荧光信号检测光学模块，其光学规格见表2。荧光通道1（FL1）适用于激发GFP并接收其发射光，同时也能检测黄色荧光蛋白（YFP）信号，但激发效率低于GFP。
激发波长 | 470nm，带宽 40nm（通带范围 450–490 nm） |
二向色镜（截止波长） | 495 nm |
发射光（FL1 通道） | 530nm，带宽 50nm（通带范围 505–555 nm） |
发射光（FL2 通道） | 600nm 长通滤片（LP=Long Pass，透过＞600 nm 的光） |
表2. Luna-FL光学规格
图1. Luna-FL光学模块示意图
- 阴性对照策略
使用LUNA-FL™荧光细胞计数仪测定GFP转染效率时，需先分析10 µL阴性对照样本（未转染对照或模拟转染对照），以此测定细胞系的本底荧光值。随后检测实验样本，荧光强度超过本底水平的细胞即判定为”已转染”。该检测策略与最常用的流式细胞术分析方法一致。
Luna-FL™通过整合荧光显微镜的硬件配置与流式细胞术的算法，兼具两者的双重优势：价格合理、无需专业培训、无需专人操作、零维护成本、检测结果精准可靠，并能处理复杂样本。
03
用 LUNA-FL™ 测 GFP 转染效率的完整操作步骤
(1)根据转染方法要求，维持293T细胞健康状态
(2)进行GFP转染实验，并设置阴性对照（未转染对照，或无质粒的模拟转染对照）
(3)转染后24~72小时收集细胞
(4)（可选）计数细胞数量
(5)将适量阴性对照细胞加至PhotonSlide™
(6)点击”设定阴性对照”按钮
(7)将适量实验样本细胞加至PhotonSlide™
(8)点击”计数样本”按钮
04
一次计数能拿到哪些结果？
Luna-FL™约30秒即可计算出总细胞浓度与GFP阳性细胞浓度（图2），同时显示GFP阳性细胞百分比、总细胞数、GFP阳性细胞数及平均细胞大小等信息。
图2. GFP转染典型结果界面
图3. GFP转染典型结果界面
可通过LUNA-FL™仪器的”标记”功能验证GFP转染检测的准确性。启用该功能后，被仪器软件模块判定为GFP阳性细胞的样本会被绿色圆圈标注（图3）。用户通过对比图像中细胞的绿色荧光强度与绿色标记圈的存在情况，即可直观验证Luna-FLTM软件模块的分析准确性。此外，用户还可通过调节明场与绿色荧光图像来优化成像质量。
GFP荧光强度与细胞数量的分布情况可以直方图形式呈现（图4），其展示方式与流式细胞术相同。系统将自动绘制对照组与实验组的曲线图并确定阈值，用户也可手动调整阈值，相应的GFP阳性/阴性细胞百分比将实时更新。
LUNA-FL™ GFP 荧光强度-细胞数量直方图分析界面（对照组与实验组曲线及阈值）
氢气发生器不仅仅是一个供气设备，它更代表了一种高效、安全、环保的实验室管理理念。如果您的实验室正面临氢气钢瓶管理的困扰，或希望提升分析工作的稳定性与效率，不妨考虑升级至点成 F-DGSi 的DC-COSMOS 系列氢气发生器系统。
我们点成生物的技术团队可以根据您的具体应用场景和需求，为您提供从选型咨询到安装调试的全套解决方案，助您构建更智能、更可靠的实验室供气系统。
05
结论
除细胞计数功能外，Luna-FL™还免费提供细胞术分析功能，成功融合了荧光显微镜与流式细胞术的优势，成为测定GFP转染效率的理想系统。
附：
关于点成生物与Aligned Genetics（原Logos Biosystems)
LUNA-FX7™ 是Aligned Genetics（原Logos Biosystems) 的全自动细胞计数仪产品，由点成生物提供中国市场的技术支持、应用验证与售后服务。点成生物应用技术团队在细胞分析方向的能力覆盖：
- 方法开发：明场（台盼蓝）与荧光（AO/PI）双计数模式的参数优化与协议定制
- 选型支持：按样本通量、浓度区间与耗材预算推荐载玻片与机型组合
- 培训与售后：装机培训、方法迁移（从血细胞计数板到自动计数）、定期校准
欲了解产品详情或获取专属解决方案，请访问我们的产品页面或直接联系我们的技术专家。
